多靶标检测是分子诊断技术领域重要应用之一，在多色荧光分析技术中，可检测靶标数受限于PCR仪荧光通道数。多色熔解曲线分析技术在多色荧光的基础上结合了熔解曲线法，增加了单一荧光通道可检测靶标数量，使可检测靶标数大大增加，具有通量大、操作简单、成本低、精度可靠等优点。

尽管如此，目前的多色熔解曲线分析技术仍面临着众多挑战，如：灵敏度低、特异性差、基线不平、倒峰、易突变模板不适用等。针对这些挑战，太阳成集团结合底层技术方法创新，开发专能优品，形成修饰原料、酶、荧光标签三套熔解曲线解决方案。

熔解曲线法难点

1. FRE探针的荧光强度高度依赖于荧光基团和淬灭基团的距离和波谱重叠，探针序列长度受限（≦30 nt），Tm值调节困难

2. 非对称方法建立了荧光变化与Tm值的联系，但由于是线性扩增，扩增产量低，灵敏度低

3. 对称扩增是指数扩增，可以极大提高扩增产量，灵敏度高，但在建立荧光变化与Tm值二维联系上，存在技术难点

熔解曲线荧光探针解决方案

针对多色熔解曲线探针设计复杂、基线不平、倒峰、灵敏度低等问题，太阳成集团基于非对称溶解曲线和对称熔解曲线分别设计了RQP系列荧光探针和RQ系列荧光探针，可在qPCR仪器常用通道中使用，适用于一管式多靶点检测，包括病原DNA多重，多联检等。

一、非对称熔曲荧光探针解决方案（RQP系列）

产品信息

RQP系列荧光探针由5'荧光修饰和3'RQP组成，常用的四个荧光通道可选用以下组合：

产品特点

1、探针设计灵活

RQP系列探针打破FRET探针长度限制、GC含量过高等问题，探针长度不受限，也无需分子信标设计，Tm调节更灵活，设计更简单。

2、熔曲检测结果

（1）熔曲峰高

避免因为熔曲峰过低而造成的误判

（2）避免“鼓包”

RQP探针发生碱基错配不会发生荧光变化，不会出现非特异熔曲峰，可有效避免非预期的“小鼓包”。

（3）基线平，无倒峰，判读更准确

RQP探针本身在扩增过程中和熔解曲线分析过程中都不会发生荧光变化，避免倒峰，同时使基线更加光滑平整，有助于准确判读。

下图为RQP探针和FRET探针熔解曲线测试对比图，RQP探针基线明显更平稳。


RQP探针	FRET探针

二、对称熔曲荧光探针（RQ系列）

产品信息

RQ系列荧光探针由5'荧光修饰和3'RQ组成，常用的四个荧光通道可选用以下组合：

产品特点

1、太阳成集团专有技术，不涉及目前对称熔曲法任何专利

2、设计简便，无需针对熔曲的探针引物特殊设计，只需要采用太阳成集团RQ修饰专有技术

3、熔曲检测结果

（1）灵敏度高，普适性好，降低漏检风险

RQ修饰不影响扩增，灵敏度与Taqman探针法相当，远高于不对称熔解曲线，每个靶标检测限均可达20copy/反应。


6个靶标均为500 copy/反应	6个靶标均为50 copy/反应	6个靶标均为20 copy/反应
如上图，蓝色为BF490/修饰探针，从左到右靶标为HPV 56型、59型、68型；绿色为BF533/修饰探针，从左到右靶标为HPV 35型、73型、51型